Real-time RT-PCR

Real-time RT-PCR es una técnica establecida para la cuantificación de mRNA de muestras biológicas. Esta permite realizar dos tipos de cuantificación diferentes de expressión génica en función del objetivo del estudio:
  • Cuantificación absoluta:
    Permite obtener la cantidad de ácido nucléico (número de copias, µg) respecto la cantidad de muestra inicial (por células, por µg de RNA).
  • Cuantificación relativa:
    Permite obtener una cantidad relativa de ácido nucléico de interés en cantidades equivalentes de muestras de diferentes grupos; ex: enfermos vs controles.

La herramienta que se presenta está diseñada para la cuantificación relativa de la expressión géncia mesurada por Real-time RT-PCR en sistemas ABI 7900 Sequence Detection (Applied Biosystems).
A lo largo del análisis el algoritmo implementado sige varias etapas para obtener un análisis de los datos òptimo.

  1. Normalización respecto un gen de referencia
  2. Análisis paramétirco
  3. Gráficos generados

Aquí puede ver un ejemplo de com utilizar la aplicación que se presenta a continuación.

Análisis de datos
-Fichero de muestras a procesar:
-Fichero con los datos de ct:
-Título:
-Genes de referencia (separados por /)
ex:HPRT1-Hs99999909_m1/18S-Hs99999901_s1
-Introduce cada grupo con su ID correspondiente (separados por ;)
ex: 1,"controles";2,"enfermos"
-Fichero con los datos de eficiencia:
si se supone una eficiencia de 2, no es necesario adjuntar el fichero

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